Transformación de Beauveria bassiana Bb9205 con genes pr1A, pr1J y ste1 de Metarhizium anisopliae y evaluación de su patogenicidad sobre la broca del café

Resumen

Beauveria bassiana cepa Bb9205 fue transformada con genes de proteasas tipo subtilinas (pr1A, pr1J) y esterasa (ste1) aislados de Metarhizium anisopliae que están involucrados en la patogenicidad contra insectos. El objetivo del experimento fue aumentar la patogenicidad de la cepa contra la broca del café, Hypothenemus hampei. Para esto, se clonaron los genes en el plásmido pBarGPE1 que confiere resistencia al herbicida glufosinato de amonio. Se obtuvo un cultivo monoespórico de la cepa Bb9205, cuya patogenicidad fue del 78% de mortalidad contra H. hampei, usando 1 x 106 esporas/ml. Con este monoespórico se produjeron protoplastos. Con respecto a la producción de protoplastos se optimizó la metodología obteniendo una concentración de 3 x 107 protoplastos/ml después del pre-tratamiento enzimático, durante 4 horas en agitación lenta a 37°C. Se realizó la transformación con los plásmidos pBarGPE1-pr1A, pBarGPE1-pr1J y pBarGPE1-ste1 mediante los métodos de PEG y electroporación. Dos transformantes con el gen pr1A y uno con el gen ste1 resistentes a 25 µg/ml del herbicida glufosinato de amonio exhibieron incremento de actividad proteolítica y esterolítica, respectivamente. Se evaluó, en pruebas de laboratorio, la patogenicidad de las cepas de B. bassiana transformadas comparándolas con la cepa Bb9205 no transformada monoespórica. La expresión constitutiva de la proteasa en la cepa transgénica Bb9205-pr1A mejoró su actividad insecticida al demostrar un incremento de mortalidad del 21,7% y una disminución del 14,3% en el tiempo de mortalidad sobre la broca del café. El transformante Bb9205-ste1 disminuyó en un 9,5% el tiempo de mortalidad sobre broca al compararse con Bb9205 sin transformar. Los resultados indican que con el mejoramiento de cepas de Beauveria, por medio de transformación genética, se puede lograr un control biológico mejor.